【樣本要求】

1.樣本類型和采集

血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置0.5-2小時(shí)或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜趦H供科研使用，不得用于臨床診斷。-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。細(xì)胞裂解液: 吸棄培養(yǎng)液，用 PBS（0.01 M，pH 7.4）將細(xì)胞洗一遍。用細(xì)胞刮刮下細(xì)胞（不能用胰酶和 EDTA 處理），加入 2-5mL PBS（0.01 M，pH 7.4）。懸浮細(xì)胞可省略。收集細(xì)胞懸液，4℃1000×g 離心 10min，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的 PBS 潤(rùn)洗 3 次。加入適量的預(yù)冷 PBS 或非變性細(xì)胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細(xì)胞,通常 6 孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要 150-250μL PBS 重懸。 將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復(fù)凍融 3 次，使細(xì)胞充分裂解,也可將樣品進(jìn)行超聲破碎，以達(dá)到裂解的目的。4℃ 10000×g 離心 10min，除去細(xì)胞碎片，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。.樣本保存和穩(wěn)定性樣本在 2-8℃條件下，可以儲(chǔ)存 72h，在- 20℃或-80℃可以儲(chǔ)存6 個(gè)月及以上。樣本收集后，不是一次檢測(cè)完，請(qǐng)按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融