大鼠褪黑素ELISA試劑盒 ELISA 包被的條件 包被用抗原或抗體的濃度，包被的溫度和時間，包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗的特點和材料的性質(zhì)而選定?？贵w和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置過夜，37℃中保溫2小時被認為具有同等的包被效果。包被的zui適當濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化，每批材料需通過實驗與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。
大鼠ELISA試劑盒是科學(xué)實驗中比較常用的檢測試劑，種屬大鼠ELISA試劑盒的試劑盒類型有許多種，比如：大鼠褪黑素ELISA試劑盒、大鼠瘦素（LEP）ELISA試劑盒、大鼠透明質(zhì)酸（HA）ELISA試劑盒、大鼠白介素8（IL-8/CXCL8）ELISA試劑盒、大鼠抗心磷脂抗體IgA（ACA-IgA）ELISA試劑盒、 大鼠載脂蛋白E（Apo-E）ELISA試劑盒、 大鼠抗促甲狀腺素受體抗體（TRAb）ELISA試劑盒、大鼠組蛋白H2b（histon-H2b）ELISA試劑盒等 

優(yōu)質(zhì)大鼠褪黑素ELISA試劑盒如何選擇
現(xiàn)在市面上的 既有國產(chǎn)也有進口，數(shù)量繁多令人目不暇接，怎樣才能選出zui適用的產(chǎn)品呢？首先當然得根據(jù)我們所要檢測的分子進行檢測，除此以外也還有一些需要加以考量的因素。
1. 抗體類型
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA，實際上有時候二者結(jié)合效果更好。例如，對于雙抗夾心法而言，用多抗進行捕獲而單抗進行檢測有時更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原，隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。
雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測抗體（不論多抗還是單抗）的配對很有講究。我們不希望捕獲抗體與檢測抗體競爭抗原上的同一位點，為此我們就需要確保捕獲抗體和檢測抗體所識別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測抗體之間發(fā)生了沖突，就會對實驗結(jié)果產(chǎn)生較大影響。要避免這一問題，我們可以選擇購買“matched pair”的捕獲/檢測抗體對，這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗證才推薦的好組合。
2. 實驗類型
ELISA試劑盒有多種類型，不過它們都有一個共同特點，就是進行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點ELISPOT是兩種特殊的類型，In-cell ELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細胞進行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測。ELISPOT有點像蛋白印跡Western blot，先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細胞，然后在膜上檢測細胞分泌的抗原形成斑點。此外，還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進行ELISA實驗。
通常人們使用雙抗夾心法進行ELISA實驗，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測抗體之間，這種方法既靈敏又有效，受到了許多研究者的青睞。不過有時候雙抗夾心法并不是*選擇，例如有時候抗原特別小讓兩個大抗體難以附著，又或者抗體只有一個抗體結(jié)合位點。在上述情況下，競爭性ELISA就更為適用，這種方法是采用帶標記的純化抗原與樣本中無標記的抗原進行競爭，以結(jié)合捕獲抗體。
3. 檢測方式
如今檢測ELISA有許多途徑，我們可以根據(jù)自己的偏好進行選擇。一般ELISA檢測的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物，抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶（例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP），而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物（如3，3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）。這種酶促反應(yīng)具有特征性的顏色，可以通過分光光度計進行檢測，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上，也可以結(jié)合在二抗上，還可以使用鏈霉親和素標記的酶與親和素標記的一抗結(jié)合。此外ELISA的結(jié)果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測等。
4. 交叉反應(yīng)
如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會影響整個實驗的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個因素。盡管現(xiàn)在購買源自動物的抗體越來越容易，我們?nèi)杂斜匾_認一下是否會產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問題。在用雙抗夾心法進行ELISA檢測時，檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗，而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測用二抗與捕獲抗體結(jié)合，實驗特異性就會大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗，來避免上述問題。與此同時，了解試劑盒中提供的buffer也是有必要的，以免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分，使檢測結(jié)果收到影響。
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